作者：北京协和医院检验科博士后 马晓丽
 
近年来，液相色谱串联质谱技术（LC-MS/MS）在临床检验领域受到广泛关注。该技术具有特异度高、可同时区分定量多种代谢物等特点，正逐渐从科研应用走向临床实践前沿。
 
北京协和医院检验科邱玲团队自2012年开始筹建临床质谱实验室，至今已开展儿茶酚胺及其代谢物、25种类固醇激素、极长链脂肪酸等近五十项临床检测项目，对嗜铬细胞瘤及副神经节瘤、先天性肾上腺皮质增生、肾上腺脑白质营养不良等疾病的诊断及鉴别诊断提供了巨大帮助。
 
近期，邱玲团队禹松林等人在国际上首次开发出基于LC-MS/MS技术测定胃泌素G34和G17两种亚型的方法，并发表于国际临床化学检验Top1期刊《Clinical Chemistry》（https://doi.org/10.1093/clinchem/hvab097）：
 
题目：Analytical and Clinical Performance of a Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry Method for Measuring Gastrin Subtypes G34 and G17 in Serum；
 
作者：Songlin Yu（禹松林）, Danchen Wang（王丹晨）, Xiaoli Ma（马晓丽）, Yuanyuan Zhang（张元媛）, Dandan Sun（孙丹丹）, Yutong Zou（邹雨桐）, Jialei Yu（于佳磊）, Fang Zhang（张芳）, Guohua Yang（杨国华）, Shaowei Xie（谢少伟）, Qian Cheng（程倩）,Xinqi Cheng（程歆琦）（因出版方排版错误遗漏，勘误中将更正）， Ling Qiu（邱玲）
 
LC-MS/MS在多种小分子代谢物的精准检测中被认为是金标准的方法，而近年来越来越多的研究开始将其应用于多肽及蛋白的定量分析。
 
本研究中的胃泌素是一种重要的多肽类胃肠激素，大部分胃泌素是由内分泌细胞（G细胞）分泌，主要成分有两种：G17和G34（根据其含有氨基酸的数量命名）。然而常规免疫测定方法仅能检测总胃泌素或单独检测G17。本研究旨在建立液相色谱串联质谱法（LC–MS/MS）同时测定血清G17和G34。
 
本方法采用阴离子交换固相萃取法制备血清样本。并对方法的线性、定量限、回收率、精密的、基质效应等进行了详细评价。此外，本研究将所建立的LC-MS/MS方法与化学发光免疫分析法（CLIA）和放射免疫分析法（RIA）进行了比较。通过对245份来自健康对照组、疾病组（胃泌素瘤及其他疾病患者）血清样本中的G17和G34进行分析，初步评估了两种亚型的胃泌素对胃泌素瘤的诊断效能。
 
本研究的主要结果
 
1. LC-MS/MS法的总运行时间为6分钟。G17和G34及其内标的典型色谱图如图1所示。
 
图1 血清样本G17和G34及其内标的典型色谱图
 
2. 本方法的回收率
 
LC-MS/MS法测定G17和G34的回收率结果如表1所示。
 
G17和G34的回收率分别为100.7%~109.1%和94.5%~98.3%。
 
表1 LC-MS/MS法测定G17和G34的回收率
 
3. 本方法的精密度
 
G17和G34的批内不精密度分别为4.0%~14.2%和4.4%~10.4%。
 
G17和G34总不精密度分别为5.2%~14.1%和4.6%~12.4%。
 
表2 LC-MS/MS法测定G17和G34的精密度
 
4. RIA、CLIA和LC-MS/MS方法比较
 
LC-MS/MS测定的胃泌素浓度与CLIA和RIA进行比较，相关系数（r）分别为0.87和0.84。CLIA与LC–MS/MS方法的斜率为1.48（95%CI：1.33~1.61），而RIA与LC–MS/MS方法的斜率为0.81（95%CI：0.69~0.96）。CLIA和RIA方法和LC–MS/MS方法的偏差均较大（图2）。
 
图2  RIA、CLIA及LC-MS/MS法测定血清G17和G34的方法学比对
 
5. 不同人群胃泌素水平分布
 
不同人群胃泌素水平分布如图3所示。
 
在GA（胃泌素瘤组）、MENS（除外胃泌素瘤的神经内分泌瘤组）、GC（胃癌组）和VBD（维生素B12缺乏组）中，胃泌素总和（G17+G34）[中位数（四分位数）]：分别为441.9（243.3~833.6）pg/mL、17.6（10.4~210.2）pg/mL、13.8（10.1~26.4）pg/mL和66.3（11.7-828.6）pg/mL。
 
G17浓度分别为266.0（5.9~634.4）pg/mL、5.0（5.0~47.4）pg/mL、5.0（5.0~5.8）pg/mL和30.7（5.0~132.2）pg/mL，而G34浓度分别为30.4（10.9~188.3）pg/mL、8.9（5.0~30.3）pg/mL、8.8（5.1~19.5）pg/mL和10.3（5.0~241.0）pg/mL。
 
图3 不同人群胃泌素水平的分布
 
6. 本方法测定胃泌素G17和G34对胃泌素瘤的预测作用
 
健康对照组、疾病组血清胃泌素的分布及胃泌素诊断界值的建立如图4所示。
 
将健康对照组、除外胃泌素瘤组、胃癌组及维生素B12缺乏组合并作为对照组，G17+G34、G17、G34的AUC分别为0.865（95%CI：0.766–0.964）、0.807（95%CI：0.694–0.919）和0.823（95%CI：0.694–0.952）。G17+G34的尤登指数最高时，浓度为227.5 pg/mL（临床特异性：90.8%，临床敏感性：81.3%）；G34的尤登指数最高时，浓度为13.5 pg/mL（临床特异性：83.8%，临床敏感性：75%）。G17的尤登指数最高时，浓度为209.8 pg/mL（临床特异性：96.9%，临床敏感性：62.5%）。
 
图4 健康对照组、疾病组血清胃泌素的分布及胃泌素诊断界值的建立
 
结论
 
本研究在国内外首次建立可同时检测血清G17和G34的方法。该方法的建立有助于辅助诊断胃泌素升高的相关疾病。
 
实验室介绍
 
北京协和医院检验科生化与免疫专业组质谱实验室介绍：
 
北京协和医院检验科是国家临床重点专科建设项目，在2012年购入第一台液相色谱串联质谱仪，2018年后进入快速发展期，陆续购入两台高灵敏度液相色谱串联质谱仪，成立了质谱平台。
 
目前拥有液相色谱串联质谱仪（AB Sciex 4500MD、AB sciex 4000Qtrap、AB Sciex QTRAP 6500+、Waters Acquity UPLC I-Class xevo TQ-S、Waters Acquity UPLC I-Class xevo TQ-XS)，电感耦合等离子体质谱仪（Thermo iCAP Q），离子色谱等仪器。质谱技术作为检验领域较为前沿的技术，正在从基础研究走向临床检测。目前拥有6名精通质谱技术的研究人员、技术人员、研究生及博士后，具有丰富的方法开发经验。
 
目前基于该平台，进行了大量的科研及临床转化工作。目前已在Clinical Chemistry and Laboratory Medicine、Journal of Chromatography B, Clinica Chimica Acta、中华检验医学等检验医学领域有影响力的期刊发表16篇质谱方法开发的文章（SCI 10篇），22篇基于质谱技术的应用类文章（SCI 15篇），同时将所建立的方法应用于临床，目前已在临床开展25羟基维生素D2&3、维生素A/E、极长链脂肪酸、血清碘及尿碘、儿茶酚胺及其代谢物、类固醇激素等四十余种检测项目，已测定临床样本10万余例。目前，平台在医院的大力扶持下正在积极引进新的质谱仪，开发更多新方法，年内拟临床检测项目增加到70项，并进一步扩展临床服务科室及疾病种类。
 
在方法建立和应用的同时，质谱平台积极开展与临床的密切沟通，参与多学科会诊，并利用协和医院内分泌科、神经科等科室的雄厚临床资源，探索复杂结果解释，参考区间建立，临床路径优化等一系列质谱临床应用中面临挑战的解决之路。积极参与仪器、设备、试剂的开发，申报多项专利，通过与业内质谱领域前沿团队交流、学习和合作，共同推进质谱在中国的临床应用。