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新形势下新冠病毒标本采集的分类和要求解读

来源:检验医学网    阅读:

作者:黄进 陈刘俊
单位:武汉市第四医院检验科
 
目前,新冠肺炎疫情席卷全球至今已感染超过1000万人,近期北京新冠病毒肺炎疫情再次复发,大规模的核酸筛查再次拉开序幕。截至6月22日,北京市具备核酸检测能力的机构已达到128所。


 
6月23日下午,第130场北京市新型冠状病毒肺炎疫情防控工作新闻发布会召开,北京新冠肺炎疫情防控工作领导小组强调,要加快推进核酸检测,做到应检尽检、愿检尽检。凡是曾去过新发地批发市场或与其相关人员有过接触的必须全面检测,各类农贸市场、餐饮、食堂、外卖、快递、物流等人员必须全面检测,中高风险街乡、医务人员、防疫一线人员和交通、商超、银行等服务领域人员必须全面检测。依据人群风险等级把握好检测时序,重点区域要优先安排,对即将解除集中医学观察的重点人群要安排二次检测,并关注其他重点部位和高危易感人群。
 
病毒核酸检测自新冠疫情发生后对确诊病例的发挥了极大的积极作用,但是同时也不可避免的存在假阴性的现象。有些确诊病例,在几次检测核酸阴性后才检出阳性,如近期北京才通报的一例确诊前4次核酸检测阴性,第五次才检出阳性的新闻。因此,除了试剂本身的因素外,标本的正确采集与样本类型对核酸检测也有着不小的影响力。随着对核酸检测技术的不断深入,为了提高阳性标本的检出率,新型冠状病毒标本采集也有了新的分类和要求,介绍如下:
 
 
01标本采集对象


 
02标本采集要求
 
1、从事新型冠状病毒检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训(培训合格)和具备相应的实验技能。在标本采集过程中,采样人员着PPE。
2、住院病例的标本由所在医院医护人员或当地疾控机构专业人员采集。
3、密切接触者标本由当地制定的疾控机构、医疗机构负责采集。
4、根据实验室检测工作的需要,可结合病程及研究需求多次采样。
 
 
03常见采集标本种类和要求
 
每个病例必须采集急性期呼吸道标本(包括上呼吸道标本或下呼吸道标本),重症病例优先采集下呼吸道标;根据临床需要可留取便标本、全血标本、血清标本。但因考虑到普查操作的方便性和大众体检者的接受程度,目前体检中最常用的标本是口咽部拭子,其次是鼻咽部拭子。


 
1、上呼吸道标本:包括鼻咽拭子、口咽拭子等。


 
其中鼻咽拭子是近期比较推荐的一种咽拭子采集标本,鼻咽拭子的检出率要高于其他的像咽拭子的检出率。从人体解剖学上来说,咽分为三个部分,鼻咽,口咽和喉咽。口咽这部分结构经常有水或其他食物的冲刷,很可能病毒核酸残存的机会较少,而鼻咽部分在咽部属于死角部分,因此留存病毒核酸的机率是比较高的。但喉咽部分采集标本较为困难,因此上呼吸道采集标本主要是鼻咽和口咽部分。


 
采集完成后,迅速将拭子放入装有2ml裂解液的标本采集管或含RNA酶抑制剂的细胞保存液中,插入拭子后在靠近顶端处折断无菌拭子杆,旋紧管盖并用封口膜封闭,对采集管外表面进行消毒后,转移至有冰盒的运输箱内。

武汉市第四医院核酸检测之口咽拭子采集
 
2、下呼吸道标本:深咳痰液、肺泡灌洗液、支气管灌洗液、呼吸道吸取物等。


 
核酸检测中首选下呼吸道标本,但是肺泡灌洗液以及支气管灌洗液这些标本一般很难获得,因此推荐尽量获深咳的痰液的核酸检测。深咳的痰液在我们新冠疫情前期的检测中发现其阳性检出率是相当高的。
 
呼吸道样本中阳性检出率顺序:
肺组织(金标准)>支气管或肺泡灌洗液>深咳痰或抽吸痰>鼻咽拭子>口咽拭子
 
3、便标本:留取粪便标本约5-10克(花生大小),如果不便于留取便标本,可采集肛拭子。


 
便标本在《新冠病毒标本检测指南》第3版中已经提到,当时检测的目的主要是针对腹泻症状的病例来留取便标本。但是随着新冠病情的发展,发现在没有腹泻的病人大便中同样也能检测到核酸,并且能分离到活的病毒[1]。
 
4、血液标本:尽量采集发病后7天内或危重症的急性期抗凝血,采集量3-5ml,建议使用含有乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝剂的真空采血管采集血液。血液标本在疫情前期检测中核酸检出率较低,后来有研究报道血液标也能检测到比较高的阳性比例[2]。
 
5、血清标本:尽量采集急性期、恢复期双份血清。第一份血清应尽早(最好在发病后7天内)采集,第二份血清应在发病后第3-4周采集。采集量5ml,建议使用无抗凝剂的真空采血管。
 
注:血清标本主要用于抗体的测定,不进行核酸检测。
 
武汉市第四医院核酸检测之核酸提取
 
此外,还有研究发现唾液等分泌物中也可以检测到比较高的新型冠状病毒核酸阳性[3],钟南山团队报道在尿液中也能检测到新型冠状病毒核酸,并能分离出新冠病毒。此外,所有标本都应尽可能在2-4小时送至检验科或实验室,并在2-8°C下转运,且转运时间不宜超过24小时;如预计超过24小时,应在-70°C或更低温度条件下保存和转运。
 
综上所述,现在可以采集到核酸阳性且分离到病毒的标本的种类是很多的,如果我们能够采集到更多的标本的话,则更有助于阳性标本检出率的提高。如临床人员对检测结果感觉明显不符,建议对整个检测环节(如样本的采集、流转及处理等环节)进行综合分析,不排除新型冠状病毒早期感染、复发感染或合并其他呼吸道病毒感染等。如条件允许,建议采集痰液或肺泡灌洗液等敏感性更高的样本进行复测。
 
【参考文献】
[1] Yong Zhang1,&; Cao Chen1,&; Shuangli Zhu1; et.al. Notes from the Field: Isolation of 2019-nCoV from a Stool Specimen of a Laboratory-Confirmed Case of the Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) China CDC Weekly 2020, 2(8): 123-124
[2]Wei Zhang 1, Rong-Hui Du 2, Bei Li 1Molecular and Serological Investigation of 2019-nCoV Infected Patients: Implication of Multiple Shedding Routes. Emerg Microbes Infect 2020 Feb 17;9(1):386-389
[3] Kelvin Kai-Wang To 1 2 3, Owen Tak-Yin Tsang 4, Cyril Chik-Yan Yip 1.et al. Consistent Detection of 2019 Novel Coronavirus in Saliva Clin Infect Dis. 2020 Feb 12;ciaa149.

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