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破膜剂的秘密(二)

来源:检验医学网    阅读:

用去污剂自制破膜剂,皂素、Tween-20、Triton-x哪个好?
我应该选择哪种方法破膜?

用哪种方法破膜,需根据你要标记的靶抗原和要求,例如如果你需要尽可能保持细胞形态和光散射特点,那么就需要选择对形态影响小的固定和破膜成份,并且要检测的靶分子位于胞浆还是胞核,也非常重要。

常用的破膜方法主要包括:

(1)有机溶剂:例如甲醇、丙酮等,这类溶剂主要通过溶解膜脂质、凝结膜蛋白实现固定和破膜。

(2)去污剂:这类试剂可在胞膜上形成一个孔实现破膜。

每种去污剂的作用原理是什么?

皂素:选择性与细胞膜胆固醇作用,将胆固醇从细胞膜上移除,从而形成孔洞。

Triton-X和Tween-20:非选择性,同时与蛋白质、脂质作用形成孔洞,并有可能将蛋白质、脂质从细胞膜上移除。

 

不同去污剂的优点和缺点

皂素:

(1)皂素的破膜是可逆的,所以皂素一旦被洗掉,容易致破膜效果降低甚至失效,所以后续的洗液中也需要包含皂素。

(2)不能破核膜。

(3)可保证膜表面抗原的完整性。

 

Triton-X-100 & Tween-20:

Triton-X和Tween-20之间的破膜性能差不多。

(1)非选择性,可能会导致蛋白和脂质丢失。

(2)可破所有脂质层。

(3)高浓度或长时间孵育可能导致细胞裂解。

(4)两者由于均含有苯环,故可吸收紫外光,所以如果你用紫外通道的荧光素,用这两种破膜剂可能会影响结果。

(5)如果你要检测的靶抗原是外源性凝集素类(Lectin),那么用Triton-X和Tween-20可能比皂素好。

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