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外周血淋巴细胞HLA-B27表达检测

来源:检验医学网    阅读:

试验原理

        HLA-B27属于1型MHC基因。基本上表达在机体所有有核细胞上,特别是淋巴细胞表面有丰富的含量。使用荧光定量标准微球,校正HLA-B27实验条件后,测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达水平。若HLA-B27表达水平大于标准微球设定MARK,则为阳性结果;若HLA-B27表达水平低于标准微球设定MARK,则为阴性结果。

实验试剂

Anti-HLA-B27 Kit(美国BD Biosciences公司;CAT:340183),
1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE
2、HLA-B27 Calibration beads
3、FACS Lysing Solution

实验步骤

1、标本采集:使用EDTA-K2抗凝真空采血管,抽取静脉血2ml。
2、染色和固定细胞:
(1) 标本管编号A,取一只流式专用管A1。
(2) A1管加入Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 30ul。
(3) A1管中再加入全血50Ul,混均。
(4) 置室温,避光孵育15min。
(5) 加入FACSLysing溶2.0ml,置室温,避光孵育10min。
(6) 300g离心5min,弃上清液。
(7) PBS洗涤细胞两次,300g离心5min,弃上清液。
(8) 1%多聚甲醛0.5mL。
3、上机检测;分析结果;打印实验报告。

临床意义

         HLA-B27抗原表达与强直性脊椎炎发病具有高度的疾病相关性。在强直性脊椎炎患者中,95%以上个体是HLA-B27抗原阳性;而在健康人群中HLA-B27抗原表达阳性者不足7%。HLA-B27阳性个体的该病相对危险率达300%以上。现今发现与HLA-B27高度相关的疾病主要有:强直性脊椎炎、莱特病(包括腹泻、多发性关节炎、尿道炎的综合症)和急性葡膜炎。最近研究还认为与心肌炎等心脏病有关。

 

1、 先用HLA-B27标准微球校准,设定正确的“MARK”。
2、 收集T细胞太少(少于500个)、碎片污染太多(超过10%)、门中T淋巴细胞不纯(小于90%)可能引起实验结果不正确。
3、 整个实验过程中注意避光、避免抗体、血液粘附于试管壁,否则细胞不能被染色或染色不充分,而影响检验结果。
4、 溶血时间不宜过长,否则会引进白细胞破碎

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