作者：周小琳

单位：四川锦欣西囡妇女儿童医院（静秀院区）检验科


又近年底，检验科的小伙伴们是否已经完成今年的性能验证工作了呢，什么是性能验证，为什么要做性能验证？


性能验证是为了验证检测系统的几项关键性能是否能达到厂家的声明、达到实验室规定的要求以满足临床的需求，是得到可靠检验报告的基础。


当出现以下时机时，都应该进行性能验证工作：

1、实验室新安装仪器、新开展项目；

2、检验项目涉及仪器或试剂变更厂家；

3、出现可能会对检测系统造成严重的不利影响时，如仪器故障更换重要零件、搬迁及重要的周围环境发生改变；

4、基于满足检验程序的稳定性，在常规开展检验工作情况下，对重要的性能指标每12个月再次进行评估。


一、性能验证操作人员及基本要求

根据临床实验室认可标准的规定，性能验证的所有工作需要由实验室人员完成，在特殊情况下，可以请求技术支持人员的帮助；操作人员熟悉检验方法，确保仪器在良好的运行状态，使用同批号的试剂和对应校准品；最好采用病人新鲜标本避免基质效应，同时尽可能避免溶血、黄疸等干扰存在；验证线性和方法学比较时，使用样本的线性范围尽可能处于厂家声明内，浓度与医学决定值相当，以确保结果的准确性和可靠性。


二、定量检验的性能验证内容

定量检验性能验证的内容较多，根据ISO15189的要求，本文重点讨论定量检验的关键性能：精密度、正确度以及可报告范围。


1、精密度


验证材料及要求：可以使用新鲜或冷冻保存的样本，考虑到稳定性及易得性可以使用无基质效应的质控品，每个项目需至少评价两个浓度水平验证材料的精密度，且包含该项目的医学决定水平。


试剂和校准品的要求：使用同一批次的试剂，不可多次校准。


  • 批内精密度


试验方法：室内质控结果在控的前提下，在同一批次中完成对材料20次的检测；


数据统计分析与结果计算：剔除与均值相差4SD以上的数据，计算20次（至少10次）检测结果的SD和CV。


可接受标准：批内精密度< 厂家的要求或1/4TEa。


  • 批间精密度


试验方法：连续检测五天，每天一批次，每批次含有两个水平的验证材料，每个验证材料重复检测 3-5 次，同时每批次检测须满足室内质控在控的要求。


结果计算：剔除离群值后，计算检测结果的SD和CV；


判断标准：批间精密度< 厂家的要求或1/3TEa。


2、正确度：偏倚表征，是与系统误差有关的指标

   

正确度验证方案：实验室可以根据实际情况采用评估偏倚、回收试验和参考方法比较的方式进行验证，或参加能力验证、进行比对试验证明检测结果与使用相同方法的其他实验室结果的一致性。


  • 评估偏倚


选择至少两个浓度的实验室可得范围内最优且有互换性的标准物；连续检测五天，每个浓度至少每天重复检测两次，计算所有结果的均值，减去参考值即为偏倚。


  • 回收试验

       

临床标本作为基础标本，将小于总体积10%的标准溶液加入其中制成不同种浓度在测量范围内的待测样品，每个待测样本重复检测三次，计算均值。


回收率=（待测样品浓度计算均值*总体积-基础样品浓度*基础样品体积）/（加入体积*加入标准品浓度）。


  • 与参考方法比较


标本选择：8个以上在测量范围均匀分布包含医学决定水平浓度的样本，选择 CNAS 认可实验室使用的参考方法。


检测及计算：同时使用两种方法对同一标本完成三次以上检测，计算均值和偏倚。


  • 参加卫生部、临床检验中心室间质评/能力验证


回报结果如图：


image.png


  • 样本室间比对


比对实验室选择：使用同一检测方法、具有良好室内质量控制室间质评合格、通过认可的实验室。


标本要求：含有医学决定水平浓度且涵盖正常值至异常值范围的20份以上临床样本。


频率：至少每年2次。


判断标准：应有≥80%结果符合要求。


3、可报告范围

检测方法能报告的全部结果范围，包括分析测量范围和临床可报告范围。


  • 分析测量范围（AMR）


直接通过检测方法测定未经任何预处理的患者样本中待测物的浓度范围。


样品制备：选择对检测方法无干扰的高浓度和低浓度临床样本，将高低浓度标本按照以下比例制备：4H、3H+1L、2H+2L、1H+3L、4L。


检测及结果分析：随机顺序检测，有显著携带污染时用空白隔开。每份标本重复检测3次，计算均值与理论浓度之间的差异相关系数r，使用直线回归方法来确定方程y=bx+a。


判断标准：实际测量数据与理论数据的误差低于10%，并且相关系数r不低于0.95，同时b值介于0.97和1.03之间。


  • 临床可报告范围验证（CRR）


对医疗诊断治疗具有重要意义的待测物浓度范围，是实验室发放报告的根据，如果超出AMR，对样品进行稀释或浓缩后再进行检测，乘以稀释的倍数或者除以浓缩的倍数。

收集接近AMR最大值的样本，使用厂家推荐的稀释剂进行稀释，高低浓度标本均制备3个以上不同浓度标本。

高浓度样本检测3次，低浓度标本检测5-10次后，计算X、S和CV。

可报告范围的低限：以方法允许总误差为接受限，低浓度样本结果TEa小于接受限的最低浓度。

可报告范围的高限：实验数据的平均值与理论数据的偏差R值在90%到110%之间的最大稀释倍数与测量范围的高限相乘。


【参考文献】

CNAS-GL037《临床化学定量检验程序性能验证指南 》 

WS/T 492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》

GB/T 26124-2011《临床化学体外诊断试剂（盒）》

WS/T 420-2013《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》